免疫分析法

医学名词

免疫分析法是利用毒物与标记毒物竞争性结合抗体检测毒物的方法.可用于某些毒药物的筛选试验。利用免疫分析法进行检测，当没有加入非标记毒药物时，抗体完全与标记毒药物结合生成标记毒药物-抗体复合物。加入非标记毒药物后，非标记毒药物也将与抗体结合，生成非标记毒药物_抗体复合物，从而抑制标记毒药物与抗体的结合反应，使生成产物中标记毒药物的含量降低。若抗体和标记毒药物的量固定，则加入的非标记毒药物的量与复合物中标记毒药物的含量之间存在一定的函数关系。选择合适的方法检测复合物中的标记毒药物，则可据此计算出检材中毒药物的量。

应用

在药物分析中，免疫分析法的应用主要集中在以下几方面：(1)在实验药物动力学和临床药物学中测定生物利用度和药物代谢动力学参数等生物药剂学中的重要数据，以便了解药物在体内的吸收、分解、代谢和排泄情况；(2)在药物的临床检测中，对治疗指数小、超过安全剂量易发生严重不良反应或最佳治疗浓度和毒性反应浓度有交叉的药物血液浓度进行监测；(3)在药物生产中从发酵液或细胞培养液中快速测定有效组分的含量，以实现对生产过程的在线监测；(4)对药品中是否存在特定的微量有害杂质进行评价。

分类

非标记免疫分析技术：免疫扩散、免疫电泳

标记的免疫分析技术：酶免疫分析、放射免疫分析、磁敏免疫分析、其它免疫分析法（荧光免疫技术、胶体金免疫技术、发光免疫技术和铁蛋白免疫技术等）

免疫扩散

基本原理：可溶性的抗原和相应的抗体在溶液或凝胶中彼此接触，形成不溶性抗原-抗体复合物沉淀。

单向免疫扩散(Single immunodiffusion)

基本原理：指抗原和抗体两种成分中只有一种扩散，另一种被固定在凝胶中。

双向免疫扩散（Double immunodiffusion）

基本原理：指可溶性抗原与相应抗体在琼脂介质中相互扩散，彼此相遇后形成一定类型的特异性沉淀线。

电泳技术

基本原理：免疫扩散与电泳技术相结合。

类型：对流免疫电泳、火箭免疫电泳、免疫电泳、双向免疫电泳（交叉免疫电泳）

对流免疫电泳

基本原理：多数蛋白质抗原在碱性缓冲液中带负电荷，在电泳时从负极向正极移动。抗体在碱性缓冲液只带微弱的负电荷，且相对分子质量较大，电泳力较小，在琼脂电渗力作用下由正极向负极移动。结果抗原和抗体定向对流，在两孔间相遇时发生反应，并在比例合适处形成肉眼可见白色沉淀线。

火箭免疫电泳

（Rocket immunoelectrophoresis）

基本原理：也称免疫扩散，抗原在含有定量抗体的琼脂糖中泳动，两者比例适宜时，在较短时间内生成锥形的沉淀峰。在一定浓度范围内，沉淀峰的高度与抗原含量成正比。

免疫电泳

基本原理：先将待侧样本作琼脂凝胶电泳，各蛋白抗原组分被分成不同的区带，然后与电泳方向平行挖一小槽，加入相应的抗血清，把分成区带的蛋白抗原成分作双向免疫扩散，在各区带相应的位置形成沉淀弧。

标记技术

基本原理：采用荧光素、同位素或酶等示踪物质标记抗体（或抗原）进行抗原 -抗体反应，通过对免疫复合物中的标记物的测定，达到对免疫反应进行监测的目的。

标记免疫技术主要类型：放射免疫技术、酶免疫技术、荧光免疫技术、化学发光免疫技术

放射免疫标记技术（RIA）

基本原理:根据抗原抗体特异性结合的原理，以放射性同位素标记抗原或抗体，根据射线的多少定性或定量测定待检标本中抗体或抗原的量。

酶免疫标记技术（ELISA）

基本原理：指酶标记抗体或酶标记抗体进行的抗原抗体反应，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。

磁敏免疫分析（MI）

基本原理：通过分子靶标绑定方法，将纳米级导磁铁珠（免疫磁珠）与待测蛋白抗体结合并固化于巨磁阻（GMR, Giant Magneto Resistance）芯片表面，基于GMR芯片的巨磁阻效应，芯片表面的免疫磁珠会剧烈影响GMR的原态电阻，根据GMR电阻变化率实现定量测定样本中待测抗体含量。磁敏免疫分析技术属于生物芯片技术家族成员。

荧光免疫分析（FIA）

基本原理:以荧光素标记抗体或抗原作为示踪剂的一种新的免疫分析技术，其原理与ELISA相似。该法既可对液体中的抗原和抗体定量，也可对组织切片中的抗原、抗体进行定性和定量。一般由于样品、试剂的自身荧光和激发光的散射，本底荧光高，影响了测定的灵敏度。一般以镧系元素作为荧光标记（示踪剂）。示踪剂与相应抗原或抗体结合后，借助荧光检测仪察看荧光现象或测量荧光强度，从而判断抗原或抗体的存在、定位和分布情况或检测受检标本中抗原或抗体的含量。

胶体金免疫技术（CGIA ）

基本原理:以胶体金作为示踪标记物，主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑褐色颗粒，当这些标记物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点。

化学发光免疫技术（CLIA ）

基本原理：利用化学或生物发光系统作为抗原抗体反应的指示系统，借以定量检测抗原或抗体的方法，发光物质可直接作为抗原抗体的标记物，也可以游离形式用于催化剂（酶）和辅助剂标记的抗原或抗体的发光反应中。

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