液体培养基

微生物或动植物细胞的液状培养基

液体培养基（ liquid culture medium），固体培养基的对应词，是微生物或动植物细胞的液状培养基。它具有进行通气培养、振荡培养的优点。在静止的条件下，在菌体或培养细胞的周围，形成透过养分的壁障，养分的摄入受到阻碍。由于在通气或在振荡的条件下，可消除这种阻碍以及增加供氧量，所以有利于细胞生长，提高生产量。

简介

培养基（Medium）是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料，一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）以及维生素和水等。有的培养基还含有抗菌素和色素，用于单种微生物培养和鉴定。

液体培养基是培养基物理分类一种，是相对固体培养基而言的，是微生物或动植物细胞的液状培养基。在液体培养基中的培养称为液中培养、液体培养或液内培养。

培养基由于配制的原料不同，使用要求不同，而贮存保管方面也稍有不同。一般培养基在受热、吸潮后，易被细菌污染或分解变质，因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。对一些需严格灭菌的培养基（如组织培养基），较长时间的贮存，必须放在3~6℃的冰箱内。

配制方法

1.配料

配方换算→在容器中加入少量水〔蒸馏水，自然水〕→按照配方称取各种药品〔依次加入〕→加足所需水量《一药一勺，取药后立即盖上瓶盖》。

2.溶解

淀粉溶解：少量冷水调成糊状

加热溶解，特别是加有琼脂的培养基，一定要煮沸，琼脂的熔解温度95～97℃ ，且需要边

加热边搅拌以防止烧焦。

3.调PH

用1N的盐酸或的1N NaOH把培养基调节到所要求的值。

4.过滤

滤纸或棉花进行过滤。

5.分装

一般培养基放在三角瓶或试管中灭菌使用。

(1)三角瓶

若作静置培养，则100 ml培养基/250 ml的三角瓶，最多不能超过150 ml培养基/250 ml的

三角瓶，否则灭菌时培养基沸腾容易污染棉塞，造成染菌；若作摇瓶培养，则15～20 ml培养基/250

ml的三角瓶，保证通气良好。

(2)试管分装

液体培养基一般装4～5 ml，约试管的1/4高度；

固体斜面培养基一般装3～4 ml，约试管的1/5高度。

6.包扎

分装好后，塞上棉塞，在用牛皮纸将棉塞包裹好，防止灭菌时水份进入把棉塞弄湿。

7.灭菌

按配方上要求的温度、压力进行高压蒸汽灭菌。如果灭菌的温度太高，营养成分会被破坏，培养

基中的糖、氨基酸会使培养基的颜色变深。

8.摆斜面

灭菌后需要摆斜面的试管要趁热斜着摆放，使其凝固成为一个斜面，约占试管长度的1/2。

9.贮存

培养基在30℃下放置一天，无污染的即可使用。一般用牛皮纸包裹好存放于2-8℃冰箱中备用

配制原则

根据培养目的需要选择适宜的营养物质

由于微生物营养类型复杂，不同微生物有不同的营养要求。因此，要根据不同微生物的营养需求选择适宜的营养物质，配制针对性强的培养基。

自养微生物有较强的合成能力，能以简单的无机物如co2和无机盐合成复杂的细胞物质。因此，培养自养微生物的培养基应由简单的无机物组成。

异养微生物的合成能力较弱，不能以CO2作为唯一碳源或主要碳源，故应在培养基中至少添加一种有机物。

注意营养物质的浓度与配比要合适

微生物只有在营养物质浓度及其比例合适时才能良好生长。营养物质浓度过低不能满足现生长需要，过高又抑制其生长。例如，适量的蔗糖是异养微生物的良好碳源和能源，但高浓度蔗糖则抑制菌体生长。金属离子是微生物生长所不可缺少的矿质养分，但浓度扩大，尤其是重金属离子，反而抑制其生长，甚至产生杀菌作用。

控制培养基的条件

(1) 控制培养基的pH 配制培养基必须根据微生物的特点调节pH。各大类微生物要求的适宜生长pH范围不同。如霉菌与酵母菌一般为5.0-6.0, 细菌为6.5-7.5.放线菌为7.5-8.5.培养基的pH与其C/N有极大关系。C/N高的培养基，例如培养各种真菌的培养基，经培养后其pH明显下降;相反，C/N低的培养基，例如培养一般细菌的培养基，经培养后，其pH则明显上升。这是由于营养物质的消耗与代谢产物的积累，改变了培养基的pH，若不及时控制，将导致菌体生长停止。

(2)调节氧化还原电位(Eh) 各种微生物对培养基的Eh要求不同。适宜好氧微生物生长的Eh值一般为+0.3~+0.4V，厌氧微生物只能在+0.1V以下生长，因此，培养好氧微生物必须保证氧的供应，可在培养基中加入氧化剂提高Eh值。

(3)调节渗透压多数微生物能耐受较大范围渗透压的变化。培养基中营养物质的浓度过大，会使渗透压过高，使细胞发生质壁分离而抑制微生物生长。低渗溶液则使细胞吸水膨胀易破裂，因此，配制培养基时要掌握营养物质的浓度。常在培养基中加入适量的Nacl以提高渗透压。

原料来源的选择力求节约

配制培养基还应遵循力求节约的原则，尽量选用价格便宜、来源方便的原料。特别是在工业发酵中，培养基用量大，更应注意利用低成本的原料，降低产品成本。

灭菌处理

为了避免杂菌污染，获得微生物纯培养物，培养基必须及时严格灭菌。通常采用高压蒸汽灭菌。一般培养基用0. IMPa (121℃)维持15 ~ 30min即可彻底灭菌。长时间的高温灭菌会使某些不耐热的物质破坏，如使糖类物质形成氨基糖、焦糖。因此，含糖培养基常用0.05MPa (110℃) 灭菌20 ~ 30min某些对糖类要求更高的培养基，可先将糖过滤除菌或间歇灭菌，再与其他已灭菌的成分混合。长时间高温灭菌也会使磷酸盐、碳酸盐与钙、镁铁等阳离子形成难溶性化合物而产生沉淀。为了防止这类沉淀发生，可将这些物质分别灭菌，冷却后再混合；也可在培养基中加入少量整合剂(0.01%乙二胺四乙酸，即EDTA)使金属离子形成可溶性络合物，防止沉淀的产生。高压蒸汽灭菌一般使培养基 pH降低，应在配制培养基时加以调节。

配方简介

牛肉膏蛋白胨液体培养基

(又称营养肉汤,用于培养细菌)

成分:牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl5g,蒸馏水(或去离子水)1000mL,pH7.4士0.2.

制法:将各成分溶解于水中，于20~25℃条件下以1mol/LNaOH溶液用pH计校正pH7.4,分装三角瓶(装量以三角瓶容积的1/2~2/3为宜)，或试管(分装量以试管高度的1/4左右为宜),0.1MPa灭菌15~20min后备用。

LB液体培养基

(用于培养细菌,常在分子生物学中应用)

成分:胰蛋白胨10g、酵母膏5g.NaCl10g、琼脂15~20g,双蒸馏水1000mL，pH7.0

制法:将各成分溶于1000mL双蒸馏水中，用1mol/LNaOH(约1mL)调节pH,分装后，0.IMPa灭菌15-20min。必要时也可在培养基中加入0.1%葡萄糖。半固体培养基加入0.4%-0,5%琼脂。

豆芽汁液体培养基

(用于培养酵母菌和霉菌及霉菌原生质体融合)

成分:豆芽汁1000mL、磷酸氢二铵1g.KCl 0.2g、 MgSO4 .7H2O,0.2g.pH6.2-6.4.